bsa体表面积计算器

目的

学习基础的蛋白质分析方法。

原理

在蛋白质纯化过程中，往往需要测量溶液中蛋白质含量。此处介绍四种快速分析蛋白质的方法。这四种方法各有优缺点，所测得的蛋白质浓度也不尽相同，因此实验者需根据自己的系统选择合适的方法。

Biuret蛋白质分析法

当蛋白质或多肽在碱性条件下与铜离子反应时，由于氮原子与铜离子间的配位键结合，形成紫色的络合物。这种络合物的浓度与溶液中蛋白质浓度成正比。Biuret蛋白质分析法就是基于此原理建立。通过使用已知浓度的标准蛋白质（通常是牛血清白蛋白）溶液与biuret试剂反应后测量溶液在540 nm的吸光度，以建立蛋白质浓度与吸光度的标准曲线。对于未知样品，通过测量其在相同波长下的吸光度，并参照标准曲线，可以求得样品中的蛋白质浓度。

Biuret蛋白质分析法是一种快速简单的分析法。除了胺基酸缓冲溶液、Good’s缓冲溶液，与Tris缓冲溶液会造成异常显色现象外，干扰分析结果的因素并不多见。其缺点是灵敏度较差。

Lowry蛋白质分析法

此法的缺点是干扰因素较多，且时间控制需较为准确。由于Good’s缓冲溶液在此法中有极大的背景吸收值，因此应避免使用。溶液中含有的其他干扰物质，如硫酸铵（>0.15 %）、甘氨酸（>0.5%）及硫醇类物质，也应避免使用此法。由于不同蛋白质中所含酪氨酸和色氨酸数量不同，因此Lowry分析法不太适合用于蛋白质绝对含量的分析，但在测量同一蛋白质的浓度变化方面，此法相当适合。

除了上述两种方法外，还有Bradford蛋白质分析法以及分光光度计分析法。每种方法都有其独特的原理、优缺点和应用范围。在实际操作中，实验者需要根据样品的特性和实验条件选择合适的方法进行分析。本文还提供了品、仪器及设备的准备和实验步骤，以及结果讨论中可能遇到的问题和解决方案。