10×pbs缓冲液的配制方法，5步搞定母液

下面为您详细说明10× PBS缓冲液的配制方法，并简化为5个关键步骤，最终获得母液。

10× PBS缓冲液（磷酸盐缓冲盐溶液）的配制详解

磷酸盐缓冲盐溶液（Phosphate Buffered Saline, PBS）是一种在生物化学、分子生物学和细胞生物学实验中广泛使用的缓冲液。它提供稳定的pH环境，并含有对许多生物过程（如细胞培养、免疫组化、ELISA、Western Blot等）至关重要的氯化钠（NaCl）和氯化钾（KCl）。10× PBS母液是一种浓缩型溶液，可以通过稀释得到工作浓度的PBS溶液，从而方便储存和多次使用。

配制目标： 制备1升（L）浓度为10×的PBS母液。

所需主要试剂及仪器：

1. 去离子水（Deionized Water, ddH₂O） 或 蒸馏水（Distilled Water）：需达到实验要求的纯度。

2. 氯化钠（NaCl）： 分析纯。

3. 磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）： 分析纯（通常为十二水合物，Na₂HPO₄·12H₂O）。

4. 磷酸二氢钠（NaH₂PO₄）： 分析纯（通常为七水合物，NaH₂PO₄·7H₂O）。

5. 氯化钾（KCl）： 分析纯。

6. 分析天平： 用于精确称量试剂。

7. 烧杯： 容量至少为1升。

8. 玻璃棒： 用于搅拌。

9. 容量瓶： 1升（L）规格，用于最终定容。

10. pH计： 用于精确测量和调节pH值（可选，但推荐）。

10× PBS母液的成分及精确用量（以配制1升为例）：

氯化钠（NaCl）：80.0 g

磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O）：27.8 g

磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·7H₂O）：2.0 g

氯化钾（KCl）：2.0 g

去离子水（ddH₂O）：加至最终体积1.0 L

配制步骤（5步搞定母液）：

第一步：精确称量各组分

称量NaCl： 使用分析天平，精确称取80.0克氯化钠（NaCl）。将称好的NaCl放入一个干净的1升烧杯中。

称量Na₂HPO₄·12H₂O： 精确称取27.8克磷酸氢二钠（十二水合物）。将其加入到盛有NaCl的烧杯中。

称量NaH₂PO₄·7H₂O： 精确称取2.0克磷酸二氢钠（七水合物）。将其加入到烧杯中。

称量KCl： 精确称取2.0克氯化钾（KCl）。将其加入到烧杯中。

注意： 如果使用的是无水磷酸盐，其称量值会不同，需要根据具体化学品的纯度和化学式进行计算调整。上述数据是基于常用十二水合物和七水合物的标准值。

第二步：溶解盐类

向烧杯中加入约600-700毫升的去离子水（ddH₂O）。水量可以稍微少一些，便于后续搅拌溶解。

使用玻璃棒不断搅拌烧杯中的混合物，直至所有固体盐类（NaCl、Na₂HPO₄·12H₂O、NaH₂PO₄·7H₂O、KCl）完全溶解。确保没有可见的沉淀颗粒。

第三步：调节pH值

将烧杯中的溶液冷却至室温（如果是在加热溶解后进行，需要冷却）。

使用pH计测量溶液的pH值。10× PBS的典型工作pH范围是7.4。如果测量值偏离7.4，需要精确地用稀酸（如HCl）或稀碱（如NaOH）进行调节。

若pH偏高，逐滴加入稀盐酸（HCl），同时不断搅拌并监测pH值，直至达到7.4。

若pH偏低，逐滴加入稀氢氧化钠（NaOH），同时不断搅拌并监测pH值，直至达到7.4。

注意： 调节pH时动作要轻柔，避免引入过多气泡或剧烈搅动。记录下最终达到7.4 pH时所用酸或碱的体积，以便后续实验精确稀释时参考（虽然对于母液，通常目标是精确调节到7.4即可）。

第四步：定容至最终体积

将调节好pH值的溶液小心地转移（或直接在烧杯中）到1升的容量瓶中。

向容量瓶中继续加入去离子水，直至液面接近刻度线。使用玻璃棒引流，避免溶液溅出。

当液面接近刻度线时，改用滴管小心加水，直至弯月面底部与容量瓶的刻度线相切。

盖上容量瓶的塞子，颠倒混匀数次，确保溶液混合均匀。

第五步：储存

将配制好的1升10× PBS母液倒入洁净的储液瓶中。

标记瓶身上的内容物、配制日期和浓度（10× PBS）。

将母液储存在4°C冰箱中保存。10× PBS母液通常可以稳定保存数月。建议首次配制后尽快使用，或分装成小份以减少反复冻融对稳定性的影响。

使用10× PBS母液：

根据