流式细胞术的基本原理（新手必看！标记链霉亲和素PE-Cy7的结构功能详解Streptavidin-PE）

一、定义与概述

PE-链霉亲和素（PE-Streptavidin）是一种由链霉亲和素（Streptavidin）与藻红蛋白（Phycoerythrin，PE）通过化学交联形成的复合物。PE是从藻类生物体中提取的荧光蛋白，其发射橙红色荧光（激发波长488nm，发射波长约575nm），亮度是有机染料的5-10倍。PE-Cy7则是在此基础上结合了青色素Cy7（Cyanine 7），增强了荧光信号的检测范围和穿透能力。

二、结构与特性

PE-链霉亲和素的结构是四聚体链霉亲和素共价连接多个PE分子，形成高溶解度的复合物。其特性包括：

1. 高亲和力：具有稳定的生物素结合位点，亲和力强（Kd约为10⁻⁰M）。

2. 高亮度：PE的荧光强度远超传统染料，适用于低丰度靶标检测。

3. 低背景干扰：链霉亲和素非糖基化且电荷中性，减少了非特异性结合。

4. 抗光漂白：PE的稳定性支持长时间成像或流式分析。

PE-Cy7标记链霉亲和素则是PE与Cy7通过共价键结合，再通过氨基交联至链霉亲和素上。其特性包括：

1. 多通道兼容性：适用于多色流式分析。

2. 深层检测：近光的强穿透力有助于体内成像或厚切片。

3. 信号放大：单个PE-Cy7分子可结合多个生物素化分子，提高检测灵敏度。

三、作用原理与应用差异

生物素-链霉亲和素系统通过链霉亲和素的四价结合位点捕获生物素化分子（如抗体、核酸），形成稳定复合物。在荧光信号产生方面，PE-链霉亲和素在流式细胞术或荧光显微镜下使用，发射橙红色荧光。而PE-Cy7则通过荧光共振能量转移（FRET）发射近信号，适用于多色流式分析或深层样本检测。

四、实验操作指南

以PE-链霉亲和素在流式细胞术中的应用为例：

1. 样本制备：生物素化一抗孵育细胞。

2. 洗涤：使用PBS/0.1%BSA缓冲液洗涤。

3. 标记：加入PE-链霉亲和素孵育。

4. 检测：使用流式细胞仪分析（激发波长Ex 488 nm，发射波长Em 575 nm）。

对于PE-Cy7标记链霉亲和素的抗体标记示例，需要进行抗体与Cy7-NHS ester的偶联反应，并通过纯化去除游离染料。应用时，推荐流式染色浓度为0.1-0.5 g/10⁶细胞，储存条件为2-8C避光。

五、注意事项与提醒

使用PE-链霉亲和素时，需注意避光操作，避免反复冻融，含NaN₃的缓冲液需按有害废物处理。而对于PE-Cy7标记链霉亲和素，需注意近检测的优化，如使用专用滤光片，并进行浓度滴定以优化实验效果。仅将此试剂用于科学研究。请遵循实验室安全规范操作。此外请注意【编辑：强化生物xxn】的建议和指导。

六、类似产品与相关试剂介绍

除了 PE-链霉亲和素以外还有一些相关产品 ：APC-链霉亲和素和Cy5可以用于多色流式或成像检测 。 而 FITC 更常用于常规检测 ； Alexa Fluor 可用于激光共聚焦显微镜 ；HRP 则适用于酶联免疫或化学发光检测 。另外 ，磁珠偶联链霉亲和素可用于生物分子的分离纯化 。这些都是用于科学研究的优质工具 。请注意在正确安全的环境下使用这些试剂 。