流动相为什么必须用滤膜过滤

一、流动相过滤不严格

为了保证流动相的质量，必须预先除去其中的任何固体微粒，因为尘埃或其他杂质颗粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀。流动相建议在玻璃溶剂内蒸馏，常用的方法是过滤，可使用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的应连接砂滤棒（或片），并且输液泵的滤器应经常清洗或更换，以确保无杂质颗粒影响色谱系统的正常运行。

二、未及时清洗泵

流动相中不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相在停泵过夜或更长时间后不应留在泵内，否则可能会析出盐的微细晶体，这些晶体同样会损坏密封环和柱塞等。必须在泵入纯水充分清洗后，再换成适合色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（如甲醇或甲醇-水）。

三 流动相耗尽问题

在泵运行过程中，需留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则可能导致空泵运转，从而磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。当没有流动相流出且无压力指示时，可能是因为泵内有大量气体。此时可打开泄压阀，以较大流量（5ml/min）运转，将气泡排尽。若密封环磨损，需及时更换。

四、压力和流量不稳定的原因及解决方式

压力和流量不稳定可能是由于气泡、单向阀内异物或砂滤泵问题导致。需排除气泡，卸下单向阀进行超声清洗。对于砂滤泵，可卸下砂滤棒进行超声除气泡，或进行稀酸清洗以去除微生物和溶解盐粒。

五、压力异常的原因及应对方法

压力异常可能是由于管路堵塞或导致。需清洗和检查管路以排除堵塞和修复。在进行梯度洗脱时，需注意多种溶剂混合可能带来的特殊问题，如溶剂的互溶性等。要注意溶剂的选用范围，避免使用不相混溶的溶剂。还要注意溶剂的纯度以及彻底脱气，以避免杂质峰和气泡产生。

六、梯度洗脱中的流动相选择

在梯度洗脱过程中，需特别注意流动相的选择。不同溶剂的互溶性可能有所不同，超出一定范围后可能不再互溶。当有机溶剂和缓冲液混合时，也可能析出盐的晶体，使用时需特别小心。还要注意溶剂的粘度变化对梯度洗脱过程中压力的影响。

七、空白梯度洗脱的重要性

在进行样品分析前，必须进行空白梯度洗脱以辨认溶剂杂质峰。因为弱溶剂中的杂质在色谱柱后被强溶剂洗来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

八、六通阀的正确使用和维护

六通阀在使用过程中需注意以下几点：样品溶液必须用0.45μm滤膜过滤以减少对进样阀的磨损；转动阀芯时不能过慢也不能停留在中间位置；每次分析结束后应冲洗进样阀以避免缓冲盐和样品残留；冲洗时可用水或能溶解样品的溶剂进行冲洗。

九、色谱柱的使用和维护要点

色谱柱的正确使用和维护非常重要。在使用中需要注意避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动以免影响柱内填充状况；调节流速时应缓慢进行避免柱压突然升高或降低；非生产者指明可以反冲的情况下切不可反冲色谱柱；选择适宜的流动相以避免固定相被；可以在进样器前连接预柱对流动相进行“饱和”处理；避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内需要预处理样品或者在进样器和色谱柱之间连接保护柱保护柱可以经常更换以确保色谱柱的正常使用和延长其寿命。